國產(chǎn)液相色譜的類型按組分在兩相間分離機理的不同主要分為液-固吸附色譜法、液-液分配色譜法、化學鍵合相色譜法、離子交換色譜法和凝膠色譜法等。
1.液-固吸附色譜法
液-固吸附色譜法(LSC)是以固體吸附劑為固定相,吸附劑表面的活性中心有吸附能力,試樣分子被流動相帶入柱內(nèi)時,它將與流動相溶劑分子在吸附劑表面發(fā)生競爭性吸附。
目前經(jīng)常使用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、分子篩(極性)和活性炭(非極性)等,以硅膠較為常用。
液-固吸附色譜法的流動相可以是各種不同極性的一元或多元溶劑。其分離原理是組分在兩相間經(jīng)過反復多次的吸附與解吸附分配平衡。
液-固吸附色譜法選擇流動相的原則是:極性大的樣品需用極性強的洗脫劑,極性弱的樣品宜用極性較弱的洗脫劑。
液-固吸附色譜法選擇性好,較大允許進樣量較大,在分離幾何異構(gòu)體、族分離和制備色譜方面具有*的意義。液-固色譜還可用于分離偶氮染料、維生素、甾族化合物、多核苷芳烴、脂肪、油類、極性較小的植物色素等。
2.液-液分配色譜法
液-液分配色譜法(LLC是根據(jù)物質(zhì)在兩種互不相溶(或部分互溶)的液體中溶解度的不同而實現(xiàn)分離的方法。通過在擔體(載體)上涂漬一薄層固定液制備固定相,與流動相一起構(gòu)成液-液兩相,根據(jù)各組分在兩相間分配系數(shù)的不同,經(jīng)反復多次分配平衡而實現(xiàn)分離。
根據(jù)固定相和流動相之間相對極性的大小,可將分配色譜法分為兩類。流動相極性小而固定相極性大的稱為正相分配色譜法,常用于分離強極性化合物;流動相極性大而固定相極性小的稱為反相分配色譜法,適于分離弱極性的化合物。
分配色譜法的固定相由載體和固定液組成。載體的材料可以是惰性的玻璃微球,也可以是吸附劑。常用的固定液只有幾種極性不同的物質(zhì),如聚乙二醇、聚酰胺、正十八烷和異三十烷等。
分配色譜法中所用流動相的極性必須與固定相顯著不同,以避免固定相溶解于流動相而流失。一般原則是:若用極性較強的或親水性物質(zhì)為固定相,應以極性較弱的或親脂性溶劑為流動相;若用非極性或親脂性物質(zhì)為固定相,則應以極性較大的或親水性溶劑為流動相。選擇流動相一般根據(jù)實驗來選擇,正相色譜法常用低極性溶劑,如烴類,加入適量極性溶劑如氯仿、醇類,以調(diào)節(jié)洗脫強度。反相色譜法的流動相多以水或無機鹽緩沖液為主體,加入甲醇、乙腈等調(diào)節(jié)極性。梯度洗脫時,正相色譜法通常逐漸增大洗脫劑中極性溶劑的比例,而反相色譜法則與之相反,逐漸增大甲醇和乙腈的配比。
3.化學鍵合相色譜法
化學鍵合即用化學反應的方法通過化學鍵將固定液結(jié)合在載體表面。采用化學鍵合相的液相色譜法稱為化學鍵合相色譜法,簡稱鍵合相色譜。鍵合固定相非常穩(wěn)定,在使用中不易流失,適于梯度洗脫。由于鍵合到載體表面的官能團可以是各種極性的,因此它適用于各種樣品的分離測定。用來制備鍵合固定相的載體,幾乎都用硅膠。通常反應發(fā)生在硅膠表面的硅醇基(≡Si-OH)上,形成硅氧碳鍵型(≡Si-O-C)、硅氧硅碳型(≡Si-O-Si-C )、硅碳型(≡Si-C)和硅氮型(≡Si-N)四種類型,其中以硅烷化鍵合反應(硅氧硅碳型)較為常用,如十八烷基鍵合硅膠柱(簡稱碳十八柱,ODS柱),它是高效液相色譜法較為理想的固定相。