高效液相色譜系統(tǒng)既能用于微量組分的分析測定,又能用于大量的制備分離,靈活多樣,其應(yīng)用范圍已超過其他各種分離方法,尤其在中藥樣品的分析分離方面更充分發(fā)揮它的特長,為推動該領(lǐng)域的進步和發(fā)展作出了巨大貢獻。
高效液相色譜系統(tǒng)作為一種高精密儀器,如果在使用過程中不按照正確操作的話,就容易導(dǎo)致一些問題。其中較常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題。
1.柱壓問題
柱壓問題是使用高效液相色譜儀過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50 PSI(3.3 Bar)之間(在使用梯度洗脫時,柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。
2.壓力過高
這是高效液相色譜儀在使用中較常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時,我們應(yīng)該分段進行檢查。
1)首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。
處理方法:用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,再檢查;
2)打開Purge閥,使流動相不經(jīng)過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾白頭堵塞。
處理方法:將過濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100 PSI(6.7 Bar)以下,過濾白頭正常,再檢查;
3)把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。
處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。
3.壓力過低
1)壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏,處理方法:尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可;
2)當(dāng)然還有一個原因就是泵里進了空氣,但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),忽高忽低,更嚴重一點會導(dǎo)致泵無法吸上液體。處理方法:打開Purge閥,用3~5 ml/min的流速沖洗,如果不行,則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
以上就是高效液相色譜系統(tǒng)的常見故障及解決方法,希望能幫助大家更好地使用該系統(tǒng)。